Análise da diversidade genética e identificação de citros (Citrus spp) com marcadores moleculares e High Resolution Melting (HRM)
Nome: KAROLINNI BIANCHI BRITTO
Data de publicação: 12/12/2024
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| MARCO CESAR CUNEGUNDES GUIMARAES | Examinador Interno |
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Resumo: A citricultura desempenha um papel crucial na fruticultura nacional, englobando o cultivo de diversas espécies e variedades do gênero Citrus. Os produtores de citros, enfrentam desafios relacionados à certificação de mudas, devido à semelhança entre as folhas das cultivares e a possibilidade de troca entre elas, visto que as características morfológicas se manifestam de forma sutil e variável. A seleção de marcadores moleculares para citros é um desafio devido à baixa variabilidade molecular observada. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar polimorfismos, principalmente Polimorfismos de Nucleotídeo Único (SNPs), através da tecnologia de DArTSeq, que combina o sistema de marcadores Diversity Arrays Technology com a tecnologia de sequenciamento de nova geração, e a partir desses marcadores, desenvolver kits de identificação rápida utilizando a técnica de High Resolution Melting (HRM), que é sensível e de baixo custo. A metodologia, os resultados e discussão foram escritos em três capítulos. No primeiro capítulo, é apresentada uma revisão “Beyond the peel: exploring Citrus diversity through DArTSeq”. O estudo utilizou a tecnologia DArTSeq para analisar a variação genética em 93 acessos de nove genótipos de citros, resultando na identificação de 64.442 SNPs e 69.963 marcadores SilicoDArT, que após filtragem, foram reduzidos a 9.073 e 3.496, respectivamente. As diversas análises revelaram oito clusters distintos e seis grupos genéticos. A pesquisa também estabeleceu uma base importante para investigações futuras em genética de
citros. No segundo capítulo, é apresentada uma patente depositada no Instituto Nacional da Propriedade Industrial (INPI), intitulada “Oligonucleotídeos iniciadores e método para discriminação genética e certificação de cultivares de laranja Pera (Citrus sinensis) de interesse agrícola utilizando a técnica de High Resolution Melting (HRM)”. Um kit, com sete pares de primers para análise em HRM, foi desenvolvido para identificação de oito cultivares de laranja Pera. No terceiro capítulo, é apresentada uma patente depositada no INPI, intitulada “Oligonucleotídeos iniciadores e método para discriminação genética e certificação de porta-enxertos de citros (Família Rutacea) de interesse agrícola utilizando a técnica de High Resolution Melting (HRM)”. Um kit, com três pares de primers para análise em HRM, foi desenvolvido para identificação de sete genótipos de porta-enxertos de citros, sendo cinco espécies e dois híbridos. Esta tese contribui com análises da diversidade genética e estrutura populacional de citros, refletindo as relações entre e intraespecíficas. Foi realizada a identificação das cultivares, através dos kits de oligonucleotídeos iniciadores pela técnica de HRM. Além disso, esses kits desenvolvidos auxiliarão na rápida identificação das cultivares de laranja Pera e porta-enxertos de citros por HRM, podendo ser implementados na certificação. Assim, os marcadores propostos se mostraram eficazes na discriminação dos genótipos de citros, superando as limitações da identificação morfológica, especialmente durante as fases iniciais da planta, oferecendo um avanço significativo para o setor de citros e promovendo maior segurança aos produtores por assegurar a autenticidade do material propagativo.
