EFEITO DO CHOQUE TÉRMICO E DA INIBIÇÃO DA HSP90
DURANTE A MATURAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS BOVINOS
SOBRE O DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO
Nome: ELIZA DINIZ DE SOUZA
Tipo: Tese de doutorado
Data de publicação: 17/05/2017
Orientador:
Nome |
Papel |
|---|---|
| IURI DRUMOND LOURO (M/D) | Orientador |
Banca:
| Nome |
Papel |
|---|---|
| FLAVIA DE PAULA (M/D) | Examinador Interno |
| IURI DRUMOND LOURO (M/D) | Orientador |
| LUIZ SERGIO DE ALMEIDA CAMARGO | Examinador Externo |
| MARCO CESAR CUNEGUNDES GUIMARÃES | Examinador Interno |
| RIBRIO IVAN TAVARES PEREIRA BATISTA | Examinador Externo |
Resumo: O estresse térmico tem sido um grande problema em sistemas de produção de bovinos. Tem-se sugerido que a HSP90, uma proteína chaperona citoprotetora,possui papel também na manutenção da integridade do genoma, no entanto,seu papel durante a maturação oocitária e desenvolvimento embrionário é muito escasso. Este trabalho foi dividido em três experimentos. No primeiro experimento foi avaliado o potencial de desenvolvimento e a apoptose em embriões bovinos, adicionalmente, a abundância de transcritos c-MOS, MAPK, MATER, ZAR, GDF9, HSP901A e HSP70.1 e progressão da meiose em oócitos submetidos à diferentes doses (0, 1 e 2 μM) e tempo de exposição (12 e 24h) de 17AAG durante a maturação in vitro. No segundo experimento foi avaliado o potencial de desenvolvimento de oócitos bovinos e a apoptose em blastocistos submetidos ao choque térmico e a concentração de 2 μM de 17AAG por 12h. Ainda foi avaliado o efeito do choque térmico sobre a heterocromatina de embriões nos estágios iniciais do desenvolvimento. O terceiro experimento avaliou o potencial de desenvolvimento de oócitos expostos a 2 μM 17AAG, ao choque térmico e a interação entre eles, bem como o padrão da expressão gênica em embriões de 8 células para os genes HSF1, HSF2, HSP901A, HSP40, OCT4. Observou-se no primeiro experimento que 2 μM do inibidor de HSP90 durante a maturação in vitro prejudica o desenvolvimento embrionário posterior à fecundação. O gene da HSP70.1 foi sub-expresso (p<0,05) quando os oócitos foram cultivados com 1 μM de 17AAG por 12 h em relação ao controle. Oócitos expostos a 2 μM por 12h mostraram menor (p<0,05) quantidade de transcritos do gene GDF9 e uma maior quantidade do HSF1 em relação ao grupo controle. Para o tratamento com 1 μM por 24 h houve redução (p<0,05) na quantidade de transcritos de ZAR1 e HSP70.1 e aumento (p<0,05) na abundância dos transcritos do gene do HSF1 e redução de HSP70.1 quando oócitos foram expostos ao 17AAG por 24h. Não houve diferença (p>0,05) na porcentagem de oócitos em metafase II quando os oócitos foram analisados pelo Hoechst entre grupos tratados e controle. Os blastocistos expostos ao 17AAG apresentaram maior índice apoptótico (p<0,05) e menor número de células (p<0,05) quando os oócitos foram expostos por 24 h comparado a 12 h. Houve redução da produção de embriões e aumento da apoptose embrionária quando os oócitos foram expostos ao choque térmico por 12 h durante a maturaçãoin vitro. A estrutura da cromatina em embriões gerados de oócitos estressados termicamente foi alterada, apresentado uma formação de heterocromatina mais precoce, em estágios de 4 células, do que em embriões do grupo controle. No terceiro experimento, foi observada uma redução ainda maior no desenvolvimento embrionário para o tratamento CT+17AAG, além de redução (p<0,05) na quantidade de transcritos da HSP40 quando o grupo CT e o CT+17AAG foram comparados ao grupo controle. Quando o grupo CT+17AAG foi comparado ao CT, houve um aumento (p<0,02) na expressão de HSP90A1. Conclui-se que a HSP90 é uma proteina importante para a competência do oócito bovino e a inibição da HSP90 na maturação in vitro, interfere na abundância relativa de transcritos em oócito e embriões, aumenta a apoptose embrionária e altera a estrutura da cromatina de embriões em estágio inicial de desenvolvimento.
