CARACTERIZAÇÃO DE ANTÍGENOS E PRODUÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-PEPTÍDEOS DOS VÍRUS DENGUE, ZIKA E CHIKUNGUNYA
Nome: RAFAELA SPESSEMILLE VALOTTO
Tipo: Dissertação de mestrado acadêmico
Data de publicação: 07/10/2021
Orientador:
Nome |
Papel |
|---|---|
| MARCO CESAR CUNEGUNDES GUIMARÃES | Orientador |
Banca:
| Nome |
Papel |
|---|---|
| DANIEL CLAUDIO DE OLIVEIRA GOMES | Examinador Interno |
| MARCO CESAR CUNEGUNDES GUIMARÃES | Orientador |
| RICARDO ANDREZ MACHADO DE ÁVILA | Examinador Externo |
Resumo: VALOTTO, R. S. Caracterização de antígenos e produção de anticorpos antipeptídeos dos vírus dengue, Zika e chikungunya. 2021. 70f. Dissertação
(Mestrado em Biotecnologia) Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia,
UFES, Espírito Santo. Brasil.
Dengue, Zika e chikungunya são responsáveis por epidemias em diversos países. No Brasil, a população já enfrentou epidemiais simultâneas dessas doenças. As formas de diagnóstico são semelhantes entre elas, podendo variar entre testes sorológicos, RT-PCR e testes de captura de antígeno. Atualmente, parte dos esforços se concentram no desenvolvimento de testes de baixo custo, com resultado rápido e que não demandem estrutura laboratorial, facilitando assim sua execução em regiões com poucos recursos. Nesse cenário, o teste de captura de antígeno é um ótimo candidato, aparecendo como uma alternativa aos testes já estabelecidos. A NS1 do DENV, a NS1 do ZIKV e a E2 do CHIKV são proteínas virais que recebem destaque nos estudos para o desenvolvimento de kits de captura de antígeno, pois são mais facilmente detectadas em amostras infectadas em comparação à outras
proteínas. Pensando nisso, realizaram-se predições in silico utilizando ferramentas de bioinformática a fim de saber quais regiões dessas proteínas eram antigênicas, correspondiam à um epítopo, eram acessíveis, hidrofílicas e não estavam presentes em uma volta-β. Os 2 peptídeos preditos de cada proteína que atenderam ao maior número de características desejadas foram sintetizados e passaram por caracterização em HPLC e espectrometria de massas. Em seguida, foram inoculados em coelhos para produção de anticorpos contra cada antígeno. Os soros foram coletados, e Dot blots e Western blots foram realizados. Os peptídeos preditos foram 103SLRPQPTELKY113 da NS1 DENV-2, 111YKYSWKSWGKA121 da NS1 DENV-
1, 238ESDLIIPKSLAGPLSH253 e 83GVQLTVVVGS92 da NS1 ZIKV, e
24EGHSCHSPVAL34 e 147HGKELPCSTYVQS159 da E2 CHIKV. A partir dos
resultados do Dot blot, pôde-se perceber que todos os soros produzidos
apresentaram anticorpos anti-peptídeos, pois todos mostraram interação com os peptídeos. Como no Western blot utilizaram-se as proteínas completas no lugar dos peptídeos, alguns resultados divergiram do anterior. De todos os soros produzidos, o anti-SLR, anti-YKY e anti-ESD apresentaram interação com as proteínas completas expressas em Escherichia coli e células HEK293, com exceção dos soros contra peptídeos da E2 CHIKV, que foram testados apenas com a proteína expressa em células de inseto contendo baculovírus recombinante, e o soro anti-EGH reagiu à proteína.
Palavras-chave: Dengue. Zika. Chikungunya. Bioinformática. Peptídeos
